掃描型分光光度計由光源產(chǎn)生復(fù)合光，進入單色器后通過光柵或棱鏡將光線分解為不同波長的單色光。這一過程確保了每一時刻僅有特定波長的光照射到樣品上；當(dāng)單色光穿透盛放于透明樣品池中的被測物質(zhì)時，某些波段會被選擇性吸收，遵循朗伯-比爾定律(A=kbc)，即吸光度與濃度、液層厚度成正比關(guān)系；未被吸收的光抵達檢測器并轉(zhuǎn)化為電信號，這些模擬量經(jīng)放大處理后由數(shù)據(jù)處理單元進行模數(shù)轉(zhuǎn)換，生成光譜曲線；用戶設(shè)定波長范圍后，系統(tǒng)自動驅(qū)動光柵連續(xù)旋轉(zhuǎn)實現(xiàn)全波段掃描，逐點記錄各波長下的吸光度值，形成完整的吸收圖譜。
 

　　掃描型分光光度計的測定步驟：
 

　　1.準(zhǔn)備工作
 

　　-連接電源與啟動軟件：將儀器連接到穩(wěn)定的電源上，確保電壓匹配；同時檢查并啟動配套的光譜分析軟件，確認(rèn)設(shè)備間的通信正常。
 

　　-環(huán)境適配：放置于干燥、堅固平穩(wěn)的工作臺，避免強光直射，室內(nèi)溫度控制在15℃-35℃，相對濕度不超過80。
 

　　2.基線校準(zhǔn)
 

　　-使用無吸收的空白試樣覆蓋樣品池，調(diào)節(jié)光強至合適范圍后執(zhí)行“基線校準(zhǔn)”操作，系統(tǒng)會記錄當(dāng)前光強作為后續(xù)測量的基準(zhǔn)值。這一步可消除溶劑或比色皿本身的干擾信號。
 

　　3.樣品處理與裝載
 

　　-比色皿選擇與清潔：選用透明且無劃痕的專用比色皿，倒入待測溶液前需保證其表面潔凈、無氣泡。避免觸碰光學(xué)面以防污染或損傷；
 

　　-濃度控制：通過適當(dāng)稀釋使樣品濃度處于儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)，防止吸光度過高導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。
 

　　4.參數(shù)設(shè)置與掃描測試
 

　　-波長選定：依據(jù)實驗?zāi)康?如蛋白質(zhì)選280nm、核酸選260nm)或預(yù)實驗結(jié)果確定目標(biāo)波長范圍；
 

　　-啟動掃描：放置裝有樣品的比色皿后點擊“開始測量”，儀器自動完成全譜掃描并生成吸收光譜曲線。
 

　　5.數(shù)據(jù)處理與分析
 

　　-利用軟件提取特定波長下的吸光度數(shù)值，繪制光譜圖，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量計算，解讀峰位、強度等特征以推斷樣品成分及濃度變化。